植物原生质体的分离方法主要有机械法和___________。

植物原生质体的分离方法主要有机械法和酶解法。

1、机械分离法：常用于分离藻类原生质体，采用渗透方法使细胞发生质壁分离，用刀把细胞壁切破，使原生质体流出。（手工操作难度大，得率低，费时费力）

2、酶解分离法：用酶（琼脂酶，果胶酶，纤维素酶等）将细胞壁分解。（条件温和，原生质体完整性好，活力高，得率高）因此原生质体制备多采用酶解法，此法操作过程分为：取材消毒，酶解制备，原生质体收集。

植物原生质体

植物原生质体（protoplast）是指除去了细胞壁后裸露的球形细胞团。由于没有细胞壁这个细胞与外部环境之间的天然屏障，使得原生质体成为理想的实验系统而被广泛应用于基础理论研究、遗传转化、无性系变异及突变体筛选、细胞器的分离及导入、种质资源保存等领域。然而，原生质体最令人瞩目的应用是体细胞杂交。

植物原生质体融合的方法

1、盐类融合法：此法是最早的诱导原生质体融合的方法，盐类融合法的优点在于盐类融合剂对原生质体的破坏力小，其缺点是异核体形成的频率不高；

2、高Ca2+、高pH融合法：它的优点是能获得较高的融合率，其缺点是对于有些原生质体系统来说，较高的pH可能会产生一定的毒害作用；

3、聚乙二醇融合法(PEG法)：其优点是异核体的形成率很高，可重复性较强，对于大多数细胞类型来说毒性很低，形成双核体的比例很高；

4、电融合法：电融合法是将一定密度的原生质体悬浮至于一个融合的小室中，小室两端装电极，其优点是融合的条件更加数据化，便于控制和相互比较。